小鼠血清抗體效價檢測實驗
發布時間：2025-12-28 / 瀏覽數：28
將目標抗原包被在酶標板上，小鼠血清中的特異性抗體可與抗原結合；加入酶標記的二抗后，形成 “抗原 - 抗體 - 酶標二抗” 復合物，酶催化底物顯色，吸光度值與抗體效價呈正相關。
操作步驟
1、抗原包被：將純化抗原（如病毒蛋白、重組蛋白）用碳酸鹽緩沖液（pH9.6）稀釋至 1-5μg/mL，每孔 100μL 加入 96 孔板，4℃孵育過夜；PBST 洗板 3 次。
2、封閉：每孔加 200μL 5% 脫脂奶粉，37℃孵育 1 小時，洗板 3 次。
3、血清孵育：小鼠血清用稀釋液做 2 倍梯度稀釋（1:100 至 1:12800），每孔 100μL，37℃孵育 1.5 小時；設陽性、陰性血清對照，洗板 5 次。
4、酶標二抗孵育：加入 HRP 標記的抗小鼠 IgG 二抗（1:5000 稀釋），每孔 100μL，37℃孵育 1 小時，洗板 5 次。
5、顯色與讀數：加入 TMB 底物顯色 10 分鐘，2mol/L H?SO?終止反應，酶標儀測 450nm 吸光度值，以OD 值≥陰性對照 2.1 倍的最高血清稀釋度為抗體效價。
1、評估疫苗（如新冠疫苗、流感疫苗）免疫小鼠后的抗體產生水平；
2、檢測感染模型小鼠血清中病原體特異性抗體，輔助疾病診斷。
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